PCR法支原體檢測試劑盒說明書
上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。
產(chǎn)品詳情
貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
78EA10015-50T | 50T | 240.00 |
產(chǎn)品描述
支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞各個(gè)方面都造成不良影響，已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問題，因此，定期進(jìn)行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法，特異性的檢測各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對(duì)支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性引物，可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為PCR模板，特異性擴(kuò)增支原體DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小時(shí)內(nèi)即可完成，本試劑盒檢測靈敏度高，可檢測低至20個(gè)拷貝的支原體。
產(chǎn)品組分
組成 | 78EA10015-50T |
Mycoplasma PCR Mix（2×） | 1 mL |
Mycoplasma Primer Mix | 100 μL |
Positive Control | 50 μL |
Mycoplasma Free Water | 1 mL |
使用方法
使用方法
1. 樣品準(zhǔn)備：取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用無支原體去離子水水稀釋后，取適量樣本于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板；
2. PCR體系配制：每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（將1 μL待檢樣品換成等量的無支原體去離子水）與陽性對(duì)照（在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template），實(shí)驗(yàn)時(shí)戴一次性口罩與手套，謹(jǐn)慎操作，防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染；
3. PCR程序設(shè)置：
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 周期 |
Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 20 s | 30 |
Annealing | 56℃ | 25 s |
Extension | 72℃ | 10 s |
Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
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4. 凝膠電泳：取10 μL PCR產(chǎn)物，使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測；
5. 結(jié)果分析：每次實(shí)驗(yàn)通過與陰性對(duì)照、陽性對(duì)照檢測結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況，陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對(duì)照檢測結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染，建議重新實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果。如有必要，也可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測序，以確定具體的支原體種屬。
注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒可以檢測M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis，M.pirum，Ureaplasma spp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。
2. 所有試劑在使用前于冰上充分解凍、混勻，使用完畢后于-20℃保存。
3. 每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陰性對(duì)照、陽性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組建議設(shè)置樣品模板梯度。
4. 操作時(shí)必須佩戴口罩，嚴(yán)格按照PCR操作標(biāo)準(zhǔn)，防止引入外源污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5. 為了確保細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的可靠性及穩(wěn)定性，建議定期進(jìn)行支原體污染檢測。
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
運(yùn)輸及保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃保存，有效期12個(gè)月。
產(chǎn)品用途
《PCR法支原體檢測試劑盒》（PCR Mycoplasma Detection Kit）可用于檢測一切可能含支原體的樣品，比如：（1）體外細(xì)胞培養(yǎng)的上清；（2）血清；（3）各種體液，如唾液、尿液、鼻腔分泌物等；（4）別的液體樣品。本產(chǎn)品僅供研究使用。
